标题:荧光显微镜细胞成像中的应用-荧光蛋白影像

信息分类:站内新闻   作者:yiyi发布   时间:2017-3-12 3:03:04 将本页加入收藏

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荧光显微镜细胞成像中的应用-荧光蛋白影像

    紧凑的桶状结构和内在的发色团是水母和珊瑚突变体的特征性
结构。这些结构可以保护细胞的环境免受发色团光化裂解产物的影
响,也可以保护发色团免受荧光衰竭因素的影响。在成像时通常遇
到的两个此类因素是光漂白和pH过高或过低。荧光团的光漂白(激
发导致的破坏)目前了解较少,但却是荧光成像的限制因素。荧光
光漂白现象有时通过光漂白量子场和时问常数来描述,但对于细胞
生物学者,和其他的荧光素相比更常见,也更实用。例如,EBFP比
ECFP容易发生光漂白,而ECFP比EGFP或者EYFP更易发生光漂白。据
报道,DsRed或mRFPl比EGFP更易发生光漂白。
    荧光蛋白在pKa值在4.5~8.0之间时对pH比较敏感。然而,
许多突变体,如黄色荧光蛋白,选择性变异可使这种pH敏感性降至
中等水平。
    作为一种独特的、遗传密码编码的荧光素标记,GFP或其他荧
光蛋白在活细胞成像中的应用非常广泛。作为一种成像标记,他们
的用途包括:细胞内蛋白定位,蛋白质通过分泌、内吞途径的转运
,蛋白质出核和入核,细胞内细胞器追踪以及有机体内细胞示踪。
荧光蛋白被用作监测多种生化因素的敏感分子,如细胞内pH、细胞
内的钙离子以及细胞不同部位的蛋白磷酸化。除了生化参数外,遗
传编码的感受器在监测基因表达和细胞内蛋白质与蛋白质的相互作
用等方面,可加强活细胞的成像能力。
    下面讨论的问题应该被认为是制作活细胞荧光蛋白影像的开端
。具体方案和步骤因试剂、设备,甚至同一设备配置的不同而不同










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